Elektroforéza je laboratorní technika prováděná s cílem oddělit molekuly podle jejich velikosti a elektrického náboje, aby bylo možné stanovit diagnózu onemocnění, ověřit expresi proteinu nebo identifikovat mikroorganismy.
Elektroforéza je jednoduchý a levný postup, který se používá v laboratorních rutinách a ve výzkumných projektech. Podle účelu elektroforézy může být pro dosažení diagnózy nutné provést další testy a vyšetření.
K čemu to je
Elektroforézu lze provádět pro různé účely, a to jak ve výzkumných projektech, tak v diagnostice, protože se jedná o jednoduchou a nízkonákladovou techniku. Lze tedy provést elektroforézu za účelem:
- Identifikujte viry, houby, bakterie a parazity, přičemž tato aplikace je častější ve výzkumných projektech;
- Test otcovství;
- Zkontrolujte expresi proteinů;
- Identifikujte mutace, které jsou užitečné například při diagnostice leukémií;
- Analyzujte typy cirkulujícího hemoglobinu, které jsou užitečné při diagnostice srpkovité anémie;
- Posuďte množství bílkovin přítomných v krvi.
Podle účelu elektroforézy může být pro dokončení diagnózy nutné provést u lékaře další doplňkové testy.
Jak se to dělá
K provedení elektroforézy je nezbytný gel, kterým může být polyakrylamid nebo agaróza v závislosti na objektivu, elektroforetický pufr a vana, marker molekulové hmotnosti a fluorescenční barvivo, navíc k UV nebo LED světelnému zařízení, známému také jako transiluminátor.
Po přípravě gelu je třeba umístit konkrétní předmět, aby se jamky v gelu, lidově zvané hřeben, vytvořily a gel se nechal vytvrdnout. Když je gel připraven, naneste látky do jamek. K tomu musí být do jedné z jamek umístěn marker molekulové hmotnosti, pozitivní kontrola, což je látka, o které je známo, negativní kontrola, která zaručuje platnost reakce, a vzorky, které mají být analyzovány. Všechny vzorky musí být smíchány s fluorescenčním barvivem, protože tímto způsobem je možné vizualizovat pruhy na transiluminátoru.
Gel se vzorky musí být vložen do kádě pro elektroforézu, která obsahuje specifický pufrovací roztok, a poté je zařízení zapnuto tak, aby existoval elektrický proud a v důsledku toho potenciální rozdíl, který je důležitý pro separaci částic podle jejich zatížení a velikosti. Elektroforetická doba chodu se liší podle účelu postupu a může trvat až 1 hodinu.
Po stanoveném čase je možné zobrazit výsledek elektroforetického běhu transiluminátorem. Když je gel umístěn pod UV nebo LED světlo, je možné vizualizovat pásový vzor: čím větší je molekula, tím méně migruje, přibližuje se ke studni, zatímco čím je molekula lehčí, tím větší je migrační potenciál.
Aby byla reakce validována, je nutné, aby byly pruhy pozitivní kontroly vizualizovány a aby u negativní kontroly nebylo nic vizualizováno, jinak by to svědčilo o tom, že došlo ke kontaminaci, a celý proces musí být opakován.
Druhy elektroforézy
Elektroforéza může být prováděna pro různé účely a podle jejího účelu může být použito několik typů gelu, nejběžnější je polyakrylamid a agaróza.
Elektroforéza k identifikaci mikroorganismů se běžněji provádí ve výzkumných laboratořích, avšak pro diagnostické účely lze elektroforézu použít k identifikaci hematologických onemocnění a nemocí, které se vyvíjejí s nárůstem množství proteinů, což jsou hlavní typy elektroforézy:
1. Elektroforéza hemoglobinu
Elektroforéza hemoglobinu je laboratorní technika prováděná k identifikaci různých typů hemoglobinu cirkulujících v krvi, což umožňuje identifikovat přítomnost onemocnění souvisejících se syntézou hemoglobinu. Typ hemoglobinu je identifikován pomocí elektroforézy při specifickém pH, ideálně mezi 8,0 a 9,0, přičemž se ověřuje vzor proužků, který lze porovnat s normálním vzorem, což umožňuje identifikaci přítomnosti abnormálních hemoglobinů.
K čemu se to dělá: Elektroforéza hemoglobinu se provádí k vyšetřování a diagnostice onemocnění souvisejících se syntézou hemoglobinu, jako je srpkovitá anémie a nemoc hemoglobinu C, kromě toho, že je užitečná při diferenciaci talasémie. Naučte se, jak interpretovat elektroforézu hemoglobinu.
2. Proteinová elektroforéza
Proteinová elektroforéza je vyšetření vyžadované lékařem k posouzení množství proteinů cirkulujících v krvi, a tedy k identifikaci nemocí. Tento test se provádí ze vzorku krve, který se odstředí, aby se získala plazma, část krve tvořená mimo jiné bílkovinami.
Po elektroforéze lze vizualizovat vzor pruhů a následně graf, ve kterém je uvedeno množství každé frakce proteinů, což je pro diagnózu zásadní.
K čemu se to dělá: Elektroforéza proteinů umožňuje lékaři vyšetřit výskyt mnohočetného myelomu, dehydratace, cirhózy, zánětu, onemocnění jater, pankreatitidy, lupusu a hypertenze podle pásmového vzoru a grafu uvedeného ve zprávě o vyšetření.
Pochopte, jak se to dělá a jak pochopit výsledek proteinové elektroforézy.
Pomohla vám tato informace?
Ano ne
Váš názor je důležitý! Napište, jak můžeme vylepšit náš text:
Nějaké otázky? Kliknutím sem dostanete odpověď.
E-mail, na který chcete obdržet odpověď:
Zkontrolujte potvrzovací e-mail, který jsme vám zaslali.
Tvé jméno:
Důvod návštěvy:
--- Vyberte si důvod --- DiseaseLive betterHelp another personGain knowledge
Jste zdravotník?
NeFyzik Farmaceutický sestra Zdravotní sestra Výživář Biomedicínský Fyzioterapeut Kosmetička Jiný
Bibliografie
- Pinterest BIOSPHERE, ZNAMENÍ VĚDECKÉHO CENTRA. Elektroforéza: koncepty a aplikace. 2015. Dostupné na :. Přístup k 24. září 2019
- KASVI. Co je to elektroforéza a proč je důležitá?. K dispozici v: . Přístup k 24. září 2019
